Tạo dòng, biểu hiện và tinh sạch protein tái tổ hợp tPMT-C780 của Pasteurella multocida
,
,
,
,
,
&
Article Sidebar
Main Article Content
Tóm tắt
Chủng độc lực Pasteurella multocida tiết ra nội độc tố chịu nhiệt Pasteurella Multocida Toxin (PMT), là yếu tố độc lực chủ yếu gây bệnh tụ huyết trùng trên lợn. Vì vậy, độc tố PMT là một yếu tố tiềm năng cho các nghiên cứu chế tạo vắc xin tái tổ hợp phòng bệnh tụ huyết trùng lợn. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã tiến hành tạo dòng, biểu hiện đoạn protein đầu C của PMT (tPMT-C780) (từ amino axit 506 đến 1285 của PMT) trên vi khuẩn Escherichia coli BL21 bằng vector biểu hiện là plasmid pRSET-A. Kết quả SDS-PAGE cho thấy protein tái tổ hợp tPMT-C780 biểu hiện mạnh khi cảm ứng với IPTG 1 mM, và được xác định là protein không tan nên đã được tinh sạch theo phương pháp biến tính qua cột Ni-NTA. Dịch protein thu được sau khi tinh sạch chỉ chứa một vạch protein có kích thích tương đương với tPMT-C780 và cho phản ứng dương tính với kháng thể đặc hiệu PMT, chứng tỏ chúng tôi đã biểu hiện và tinh sạch thành công protein đầu C của độc tố PMT. Đây là nguồn nguyên liệu ban đầu cho các nghiên cứu tiếp theo để chế tạo vắc xin tái tổ hợp phòng bệnh tụ huyết trùng lợn do vi khuẩn Pasteurella multocida gây ra.
Article Details
Tài liệu tham khảo
Bui, H. Q. (1998). Characteristics of pasteurellosis in Vietnam in recent years. Veterinary Sciences and Techniques 5(1), 9-94.
Cao, H. V. (2002). Epidemiology of pasteurellosis in buffaloes, cows, and swines in Dak Lak, and some preventive and treatment measures. (Unpublished doctoral dissertation) Vietnam National University of Agriculture. Ha Noi, Vietnam.
Freddy, H., Frank, P., Koen, C., Dominiek, M., Richard, D., & Annemie, D. (2004). Efficacy of vaccines against bacterial diseases in swine. Veterinary Microbiology 100(3-4), 255-268. https://doi.org/10.1016/j.vetmic.2004.03.002
García, N., Fernández-Garayzábal, J. F., Goyache, J., Domíngue, L. & Vela, A. I. (2011). Associations between biovar and virulence factor genes in Pasteurella multocida isolates from pigs in Spain. Veterinary Record 169(14), 362-366. https://doi.org/10.1136/vr.d4869
Hoang, H. D. (2004). Study epidemiological characteristics and factors influencing pasteurellosis in buffaloes, and cows in Bac Giang (1995-2001), and suggest preventive and treatment measures. (Unpublished doctoral dissertation). Hanoi Agriculture and Forestry University, Ha Noi, Vietnam.
Hussaini, J., Abdullahi, M. A., & Ismail, S. (2012). Expression and immunogenicity determination ofrecombinant clone of Pasteurella multocida serotype B against Haemorrhagic septicaemia: Towards a vaccine development. Journal of Animal and Veterinary Advances 11(3), 351-356. https://doi.org/10.3923/javaa.2012.351.356.
Hussaini, J., Nazmul, M. H. M., Abdullah, M. A., & Ismail S. (2011). Recombinant clone ABA392 protects laboratory animals from Pasteurella multocida serotype B. African Journal Microbiology Research 5(18), 2596-2599. https://doi.org/10.5897/AJMR11.144
Kim, T. J., Lee, J. I., & Lee, B. J. (2006). Development of a toxA gene knock-out Mutant of Pasteurella multocida and evaluation of its protective effects. Journal of Microbiology 44(3), 320-326.
Le, N. V. (2015). Diseases in Vietnam swines: Effective treatment measures. Ho Chi Minh City, Vietnam: Agricultural Publishing House.
Lee, J., & Woo H. J. (2010). Antigenicity of Partial Fragments of Recombinant Pasteurella multocida Toxin. Journal of Microbiology and Biotechnology 20(12), 1756-1763.
Lee, K. E., Jeoung, H. Y., Lee, J. Y., Lee, M. H., Choi, H. W., Chang, K. S., Oh, Y. H., & An, D. J. (2012). Phenotypic characterization and random amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis of Pasteurella multocida isolated from Korean Pigs. Bacteriology 74(5), 567-573. https://doi.org/10.1292/jvms.11-0418
Liao, C. M., Huang, C., Hsuan, S. L., Chen, Z. W., Lee, W. C., Liu, C. I., Winton, J. R., & Chien, M. S. (2006). Immunogenicity and efficacy of three recombinant subunit Pasteurella multocida toxin vaccines against progressive atrophic rhinitis in pigs. Vaccine 24(1), 27-35. https://doi.org/10.1016/j.vaccine.2005.07.079
Nguyen, D. T. K. (2010). Determination of Pasteurella multocida causing pasteurellosis in buffaloes, cows in Ha Giang, Cao Bang, and initial tests of autovaccine. (Unpublished master's thesis). Thai Nguyen University, Thai Nguyen, Vietnam.
Okay, S., Ozcengiz, E., Gursel, I., & Ozcengiz, G. (2012). Immunogenicity and protective efficacy of the recombinant Pasteurella lipoprotein E and outer membrane protein H from Pasteurella multocida A: 3 in mice. Research In Veterinary Science 93(3), 1261-1265. https://doi.org/10.1016/j.rvsc.2012.05.011
Phan, P. T. (2000). Pasteurellosis of animal and poultry and its control measures. Veterinary Sciences and Techniques 7(2), 78-86.
Qureshi, S., & Saxena, H. M. (2014). Estimation of titers of antibody against Pasteurella multocida in cattle vaccinated with haemorrhagic septicemia alum precipitated vaccine. Veterinary World 7(4), 224-228. https://doi.org/10.14202/vetworld.2014.224-228